اخبار

جاوا اسکریپت در حال حاضر در مرورگر شما غیر فعال است.اگر جاوا اسکریپت غیرفعال باشد برخی از ویژگی های این وب سایت کار نمی کنند.
با جزئیات خاص خود و داروی خاص مورد علاقه خود ثبت نام کنید، و ما اطلاعاتی را که ارائه می کنید با مقالات موجود در پایگاه داده گسترده خود مطابقت می دهیم و بلافاصله یک نسخه PDF را برای شما ایمیل می کنیم.
دینگ جینگنو، ژائو ویفنگ، گروه بیماری های عفونی، بیمارستان اول وابسته به دانشگاه سوژو، شهر سوژو، استان جیانگ سو، 215000 تلفن.تومورهای دستگاه گوارش با بقای کلی 5 ساله 14.1٪.بسیاری از بیماران مبتلا به HCC در مراحل پیشرفته تشخیص داده می شوند، بنابراین غربالگری زودهنگام برای کاهش مرگ و میر ناشی از HCC ضروری است.تکنیک‌های بیوپسی مایع، علاوه بر شاخص‌های تشخیص رایج مانند آلفا فتوپروتئین سرم (AFP)، آلفا فتوپروتئین واکنش‌گر به لکتین (AFP-L3) و پروترومبین غیرطبیعی (پروتئین II ناشی از کمبود ویتامین K)، نشان داده شده است که ارزش تشخیصی در تشخیص HCC دارد.در مقایسه با روش‌های تهاجمی، بیوپسی مایع می‌تواند متابولیت‌های بدخیم در گردش را شناسایی کند.تکنیک‌های بیوپسی مایع، سلول‌های تومور در گردش، DNA تومور در گردش، RNA در گردش و اگزوزوم‌ها را شناسایی می‌کنند و برای غربالگری زودهنگام، تشخیص و ارزیابی پیش آگهی HCC استفاده می‌شوند.این مقاله به بررسی بیولوژی مولکولی و کاربرد تکنیک‌های مختلف بیوپسی مایع برای جداسازی نشانگرهای زیستی امیدوارکننده‌ای می‌پردازد که ممکن است گزینه‌های مناسبی برای ارزیابی اولیه HCC برای بهبود غربالگری اولیه گروه‌های پرخطر HCC باشند.واژه‌های کلیدی: روش بیوپسی مایع، کارسینوم سلول‌های کبدی، گروه پرخطر.
کارسینوم هپاتوسلولار (HCC) یک تومور بدخیم شایع دستگاه گوارش است که در بین موارد جدید تومورهای بدخیم در مردان و زنان رتبه ششم را دارد.1 در سرتاسر جهان، سرطان کبد سومین علت مرگ ناشی از سرطان پس از سرطان ریه و کولورکتال است که 8.3 درصد از مرگ و میرهای مرتبط با سرطان را از تمام نئوپلاسم های بدخیم تشکیل می دهد.1 پیش آگهی HCC ارتباط نزدیکی با مرحله تشخیص دارد.دلایل اصلی بقای ضعیف در HCC متاستازهای داخل کبدی، ترومبوزهای تومور ورید پورتال و متاستازهای دور که مانع برداشتن می شوند، هستند و بسیاری از این ویژگی ها در حال حاضر در بیماران در زمان تشخیص وجود دارد.
بر اساس دستورالعمل های تشخیصی و درمانی، عوامل خطر اصلی برای ایجاد HCC عبارتند از سیروز کبدی، ویروس هپاتیت مزمن B (HBV) یا عفونت ویروس هپاتیت C (HCV)، بیماری کبد چرب الکلی و بیماری کبد چرب غیر الکلی (NAFLD). ).علاوه بر این، عوامل خطر برای HCC شامل مصرف مواد غذایی آلوده به آفلاتوکسین، شیستوزومیازیس، سایر علل سیروز، سابقه خانوادگی سرطان کبد، دیابت، چاقی، سیگار کشیدن و آسیب کبدی ناشی از دارو است.گروه های پرخطر 35 و 45 ساله باید معاینات پزشکی منظم داشته باشند.غربالگری زودهنگام یک استراتژی مهم درمانی اولیه برای بهبود بقای کلی بیماران مبتلا به HCC است.
نشانگرهای زیستی مانند AFP، AFP-L3 و PIVKA-II برای غربالگری اولیه HCC3،4 توصیه می شود.تکنیک‌های بیوپسی مایع نتایج امیدوارکننده‌ای را در تشخیص زودهنگام و ارزیابی درمان نشان داده‌اند.5،6 پیشرفت قابل توجهی در بیوپسی مایع HCC حاصل شده است که ممکن است حساسیت و ویژگی بالاتری نسبت به نشانگرهای سرمی معمولی مانند AFP داشته باشد (جدول 1).
AFP یک نشانگر زیستی پرکاربرد در HCC است و در حال حاضر دقیق ترین نشانگر زیستی است که به طور گسترده برای غربالگری، تشخیص و ارزیابی اولیه بیماری استفاده می شود.افزایش مداوم سطح AFP یک عامل خطر برای پیشرفت HCC در نظر گرفته می شود.7،8 میزان تشخیص کارسینومای سلولی کوچک کبدی (sHCC) با توسعه سونوگرافی و توموگرافی کامپیوتری در حال افزایش است و مشخص شده است که AFP به ویژه نسبت به تشخیص hHCC در عمل بالینی حساس نیست.بر اساس یک مطالعه چند مرکزی گذشته نگر9، AFP مثبت در 46٪ (1338/616) از موارد HCC و 23.4٪ (150/641) از موارد sHCC یافت شد.علاوه بر این، سطح AFP در بیماران مبتلا به بیماری مزمن کبدی و سیروز افزایش می یابد.بنابراین، AFP یک اثر غربالگری محدود برای sHCC دارد.طبق دستورالعمل‌های عمل بالینی آسیا و اقیانوسیه برای سرطان کبد، استفاده از AFP توصیه نمی‌شود. شواهد بالینی نشان می‌دهد که PIVKA-II نسبت به AFP در درمان HCC برتری دارد و ترکیب PIVKA-II و AFP ارزش تشخیصی بالاتر در HCC.در مقایسه با بیوپسی بافت، بیوپسی مایع در درجه اول متابولیت های مرتبط با تومور را در مایعات بدن (خون، بزاق، مایع جنب، مایع مغزی نخاعی یا ادرار) تشخیص می دهد و کمتر به بافت ها تهاجم می کند.14 علاوه بر این، بیوپسی مایع ممکن است منعکس کننده ویژگی های بدخیم باشد که در بافت تومور اولیه وجود ندارد.15 بیوپسی مایع هنوز در عمل بالینی برای همه انواع تومورها آزمایش نمی شود، اما پتانسیل تشخیصی آنها در سرطان توجه انکولوژیست ها را به خود جلب می کند.16 بیوپسی مایع می تواند سلول های تومور در گردش (CTCs)، DNA تومور در گردش (cDNA)، RNA آزاد در گردش (ecRNA) و اگزوزوم ها را شناسایی کند.در این مقاله به بررسی ویژگی‌ها، نقش و کاربرد تکنیک‌های مختلف بیوپسی مایع در غربالگری اولیه گروه‌های پرخطر HCC می‌پردازیم.
DNA خارج سلولی (cfDNA) در نمونه های خون افراد سالم برای اولین بار در سال 1948 توسط مندل و همکاران توصیف شد.17 cfDNA یک قطعه DNA بدون سلول به طول تقریبی 160-180 جفت باز است که عمدتاً از لنفوسیت ها و سلول های میلوئیدی منشأ می گیرد.ctDNA یک قطعه DNA جهش یافته خاص است که توسط سلول های تومور در خون محیطی آزاد می شود، که نشان دهنده اطلاعات ژنومی سلول های تومور پس از برخی فرآیندهای پاتوفیزیولوژیکی از جمله نکروز، آپوپتوز و دفع است.نسبت ctDNA در cfDNA کل به طور گسترده با نوع تومور متفاوت است و قطعات cDNA معمولاً کمتر از 167 جفت باز طول دارند.18 مطالعه Underhill نشان داد که قطعات cfDNA به طور کلی کوتاهتر از cfDNA معمولی هستند.19 در مقایسه با افراد سالم، طول کل قطعات cfDNA در خون بیماران سرطانی کوتاهتر است، بنابراین cfDNA می تواند به عنوان شاخصی برای غربالگری اولیه تومور استفاده شود.غنی سازی زیر مجموعه های خاصی از طول قطعه cfDNA می تواند تشخیص cDNA مرتبط با تومورهای جامد غیر متاستاتیک را بهبود بخشد.مطالعات نشان داده اند که ctDNA در بیش از 75 درصد سرطان های پیشرفته لوزالمعده، روده بزرگ، مثانه، دستگاه گوارش، کبد، تخمدان، سینه، ملانوم و سر و گردن یافت می شود.20،21 با این حال، مقدار ctDNA در خون به محل تومور بستگی دارد.در مطالعه‌ای که توسط Bettegoud انجام شد، مشخص شد بیماران مبتلا به سرطان‌های کولورکتال، سینه، کبد، ریه و پروستات سطوح بالاتری از cDNA در خون خود نسبت به سایر سرطان‌ها دارند.در مقابل، در بیماران مبتلا به سرطان دهان، سرطان پانکراس، سرطان معده و گلیوم، غلظت cDNA در خون کمتر بود.بیست و یک
از آنجایی که ctDNA حاوی جهش های ژنتیکی مشابه سلول های تومور اولیه است، cDNA می تواند برای تشخیص جهش های ناهمگن خاص تومور و تغییرات اپی ژنتیکی، از جمله متیلاسیون، هیدروکسی متیلاسیون، تغییرات تک نوکلئوتیدی و تغییرات تعداد کپی استفاده شود.بیست و سه
متیلاسیون DNA یکی از شایع ترین تغییرات اپی ژنتیکی است که منجر به سرکوب ژن می شود.در مقایسه با سلول های طبیعی، تفاوت هایی در سطح کلی متیلاسیون ژنوم سلول تومور وجود دارد، به ویژه در متیلاسیون ژن های سرکوبگر تومور، که می تواند در مراحل اولیه تشخیص داده شود، که نشان می دهد تغییرات در متیلاسیون DNA ممکن است نشانگر زودرس باشد. تشخیص تومورزاییژن‌های سرکوب‌کننده تومور مرتبط با HCC را می‌توان با متیلاسیون پروموتر غیرفعال کرد و در نتیجه تومورزایی را تحریک کرد.24 متیلاسیون DNA به دلیل ویژگی بافتی، قابلیت تشخیص و استقلال سنی، یک نشانگر ایده آل برای تشخیص زودهنگام تومورها است.علاوه بر این، متیلاسیون DNA در مقایسه با جهش‌های سوماتیک رایج‌تر است، زیرا مناطق هدف بیشتر و چندین مکان تغییر یافته CpG در هر ناحیه از ژنوم هدف وجود دارد.25 علاوه بر چندین سایت CpG، تعداد زیادی جایگاه مستقل هیپرمتیله در ctDNA در DBX2، THY1، MT1M، INK4A، VIM، FBLN1 و RGS10.26 Xu و همکاران شناسایی شده است.در مقایسه نمونه‌های cfDNA از 1098 بیمار HCC و 835 کنترل سالم، ژن‌های مرتبط با HCC به شدت با امضاهای متیلاسیون cDNA پلاسما مرتبط بودند.25 بر اساس تجزیه و تحلیل آزمایشگاهی، یک مدل پیش بینی شامل 10 نشانگر متیلاسیون با حساسیت و ویژگی به ترتیب 7/85 و 3/94 درصد توسعه یافت و این نشانگرها با توده تومور، مرحله تومور و پاسخ به درمان همبستگی زیادی داشتند.این نتایج نشان می دهد که استفاده از نشانگرهای متیلاسیون cDNA در تشخیص، نظارت و پیش آگهی HCC نویدبخش است.در یک مدل متیلاسیون متشکل از سه ژن متیله نابجا (APC، COX2، RASSF1A) و یک miRNA (miR203) ارائه شده توسط Lu و همکاران 27، حساسیت و ویژگی مدل 27 برای تشخیص HCC مرتبط با HBV قابل مقایسه بود.80 درصدعلاوه بر این، این مدل می تواند 75 درصد از بیماران HCC تشخیص داده نشده را با سطح AFP 20 نانوگرم در میلی لیتر تشخیص دهد.ژن پروتئین 1A خانواده دامنه مرتبط با Ras (RASSF1A) توالی DNA تکراری اصلی در ژنوم انسان است.آراوجو و همکارانبه این نتیجه رسیدند که هایپرمتیلاسیون پروموتر RASSF1A می تواند یک نشانگر زیستی ارزشمند برای غربالگری اولیه HCC و یک هدف مولکولی بالقوه برای درمان اپی ژنتیک باشد.28 در یک مطالعه، هیپرمتیلاسیون پروموتر RASSF1A سرم در 73.3٪ از بیماران مبتلا به HCC یافت شد.29 عنصر نوکلئوتیدی پراکنده طولانی 1 (LINE-1) یکی دیگر از واسطه‌های بسیار فعال انتقال مجدد است.هیپومتیلاسیون LINE-1 در DNA 66.7 درصد از نمونه های سرم HCC یافت شد و با عود زودرس و بقای ضعیف پس از برداشتن رادیکال همراه بود.29 هیپرمتیلاسیون یک فرآیند ژنتیکی رایج است که نقش منحصر به فردی در ایجاد سیروز کبدی و HCC ایفا می کند.30 در مقابل، هیدروکسی متیلاسیون یک فرآیند دی متیلاسیون است که باعث فعال شدن مجدد و بیان ژن می شود و تشخیص محصول 5-هیدروکسی متیل سیتوزین (5-hmC) در این فرآیند می تواند برای شناسایی تومور استفاده شود.متیلاسیون و هیدروکسی متیلاسیون cDNA با تومورزایی مرتبط است و ممکن است به غربالگری اولیه HCC کمک کند.در مطالعه‌ای روی ۲۵۵۴ نفر، ۳۱ ژنوم ۵-hmC در نمونه‌های cfDNA یافت شد و ۳۲ ژن با مقایسه توالی‌های ۵-hmC در بیماران HCC و گروه‌های پرخطر مانند آن‌هایی که بیماری‌های مزمن داشتند، شناسایی شد.مدل های تشخیصی بیماری های کبدیو سیروزاین مدل در تشخیص HCC از بافت غیر توموری نسبت به AFP برتر بود.
جهش در مناطق کد کننده می تواند منجر به ناهنجاری های رونویسی شود که می تواند منجر به تغییر در توالی پروتئین و در نهایت سرطان شود.انواع تک نوکلئوتیدی به دلیل قابلیت اطمینان بافتی بالا و ویژگی بالای تومور و بافت، نشانگرهای ژنومی مهمی برای غربالگری اولیه تومور هستند.مطالعات متعدد مرتبط با HCC با استفاده از توالی یابی نسل بعدی (NGS) برای توالی یابی اگزوم و کل ژنوم سرطان، ژن های سلولی جهش یافته رایج مانند TP53 و CTNNB1 و همچنین چندین مورد از جمله ARID1A، MLL، IRF2 را شناسایی کرده اند.ژن های جدید، ATM، CDKN2A، FGF19، PIK3CA، RPS6KA3 و JAK1 نرخ جهش متوسطی را نشان می دهند. تجزیه و تحلیل عملکرد ژن جهش یافته نشان می دهد که تغییرات در بازسازی کروماتین، انتقال سیگنال Wnt/β-catenin و JAK/STAT، مسیر چرخه سلولی P53، اصلاح کننده های اپی ژنتیک، مسیرهای استرس اکسیداتیو، مسیر PI3K/AKT/MTOR و RAS/RAF/ مسیر MAPK کیناز نقش مهمی در انکوژن HCC ایفا می کند. 32،33 در مطالعه ای که در آن جهش های مرتبط با تومور شناسایی شد، Huang و همکاران دریافتند که فراوانی جهش های مرتبط با تومور وابسته به ctDNA 19.5٪ و ویژگی آن 90٪ بود. 34. علاوه بر این، بیمارانی که تهاجم عروقی را تجربه کردند، احتمال بیشتری داشت که جهش‌های ctDNA (0.041=P) و بقای بدون عود کوتاه‌تر (P<0.001) داشته باشند. تجزیه و تحلیل عملکرد ژن جهش یافته نشان می دهد که تغییرات در بازسازی کروماتین، انتقال سیگنال Wnt/β-catenin و JAK/STAT، مسیر چرخه سلولی P53، اصلاح کننده های اپی ژنتیک، مسیرهای استرس اکسیداتیو، مسیر PI3K/AKT/MTOR و RAS/RAF/ مسیر MAPK کیناز نقش مهمی در انکوژن HCC ایفا می کند. 32،33 در مطالعه ای که در آن جهش های مرتبط با تومور شناسایی شد، Huang و همکاران دریافتند که فراوانی جهش های مرتبط با تومور وابسته به ctDNA 19.5٪ و ویژگی آن 90٪ بود. 34. علاوه بر این، بیمارانی که تهاجم عروقی را تجربه کردند، احتمال بیشتری داشت که جهش‌های ctDNA (0.041=P) و بقای بدون عود کوتاه‌تر (P<0.001) داشته باشند.تجزیه و تحلیل عملکرد ژن جهش یافته نشان می دهد که تغییرات در بازسازی کروماتین، سیگنال دهی Wnt/β-کاتنین و JAK/STAT، مسیر چرخه سلولی P53، اصلاح کننده های اپی ژنتیک، مسیرهای استرس اکسیداتیو، مسیر PI3K/AKT/MTOR و مسیر RAS/RAF/MAPK کیناز در مطالعه ای که جهش های مرتبط با تومور را پیدا کرد، Huang et al.نشان داد که فراوانی جهش های مرتبط با تومور وابسته به ctDNA 19.5٪ و ویژگی 90٪ بود.0.34 Krome togo، در پاциентов со باсудистой инвазией чаще встречались موتاسیون цDNK (0,041=P) و آسیب کورоткая безрецидивная выживаемость (P<0,001). .34 علاوه بر این، بیماران مبتلا به تهاجم عروقی جهش های cDNA بیشتری داشتند (0.041=P) و بقای عاری از بیماری کوتاه تری داشتند (P<0.001).تجزیه و تحلیل عملکردی ژن‌های جهش یافته، بازسازی کروماتین، سیگنال‌دهی Wnt/β-catenin و JAK/STAT، مسیر چرخه سلولی P53، اصلاح‌کننده‌های اپی ژنتیک، مسیر استرس اکسیداتیو، مسیر PI3K/AKT/MTOR و RAS/RAF/MAPK را نشان داد. مسیر کیناز نقش مهمی در انکوژن HCC دارد. 32،33 在 项 检测 检测 到 肿瘤 相关 突变 的 中 ， ， ， 等 人 发现 肿瘤 相关 依赖于 依赖于 依赖于 依赖于 频率 频率 为 为 为 为 为 为 为 特异性 特异性 特异性 为 90 ٪ .34 此外 ， 经历 血管 侵犯 的 患者 患者 更 更 有 有 可能 可能 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 ctdna突变（P=0.041）和更短的无复发生存期（P<0.001）. 32.33 在 项 检测 到 到 相关 突变 的 ， ， Huang 等 发现 相关 突变 依赖于 依赖于 依赖于 依赖于 为 为 为 为 为 为 为 为 为 特异性 为 为 90 ٪ .34 此外 经历 血管 血管 血管 侵犯 发生 发生 发生 发生 ctdna 突变 突变 突变 （p = 0.041短的无复发生存期（P<0.001）.32،33 در مطالعه‌ای که جهش‌های مرتبط با تومور را پیدا کرد، Huang et al.دریافتند که جهش‌های مرتبط با تومور 19.5% به cDNA با ویژگی 90% وابسته هستند.mutaciya (P = 0,041) و более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). جهش (P=0.041) و بقای بدون بیماری کوتاهتر (P<0.001).یکی دیگر از ژن های رایج محرک HCC TP53 است که دارای نرخ جهش بیش از 30 درصد است.مطالعات نشان داده اند که فراوانی جهش های TP53 در ctDNA در خون و ادرار از 5% تا 60% متغیر است.35 مطالعه یوهان نشان داد که طیف جهش ctDNA در HCC اواخر دارای میزان جهش مشابه با HCC اولیه است، از جمله پروموتر TERT (51%)، TP53 (32%)، CTNNB1 (17%)، PTEN (8%)، جهش در AXIN1.، ARID2، KMT2D و TSC2 (هر کدام 6٪).انکوژن β-کاتنین (CTNNB1) نقش مهمی در مسیر سیگنال دهی Wnt ایفا می کند.کواکتیواتور رونویسی CTNNB1 می تواند بیان ژن را تقویت کند که می تواند منجر به تکثیر سلولی، مهار آپوپتوز و رگزایی شود.CTNNB1 همچنین می‌تواند با TERT برای القای تبدیل سلول‌های کبدی تعامل داشته باشد.33 پروموتر TERT اغلب در برخی از تومورهای جامد جهش یافته است.تغییرات در TERT، یکی از اولین تغییرات ژنتیکی در تبدیل بدخیم HCC، ممکن است به فعال شدن مجدد تلومراز در سلول‌های کبدی سیروز منجر شود و ممکن است تکثیر را افزایش داده و از پیری جلوگیری کند.گزارش شده است که جهش در پروموتر 33-37 TERT در 90-59 درصد از بیماران مبتلا به ندول های تکثیری کبدی و HCC اولیه رخ می دهد و با بقا مرتبط است.38
تغییرات شماره کپی (CNA) یک زیرگروه مهم از جهش های جسمی است.تحقیقات نشان داده است که بار گسترده و کانونی CNA یک امضای ژنومی است که قادر به پیش‌بینی نفوذ ایمنی تومور و حذف آن در برخی از انواع سرطان است.39 سیگنالینگ نفوذ فعال، فعالیت سیتولیتیک بالا، التهاب شدید و نشانگرهای ژنتیکی مرتبط با ارائه آنتی ژن در HCC.تجزیه و تحلیل آرایه داده‌های پلی‌مورفیسم‌های تک نوکلئوتیدی در 477 نفر بار کم بر CNS را نشان داد.در مقابل، تومورهای کروموزومی ناپایدار با بار CNA گسترده، علائم رد ایمنی را نشان دادند و با تکثیر، ترمیم DNA و اختلال عملکرد TP53 همراه بودند.خو و همکاراننشان داد که گروه HCC نمرات CNA بالاتری نسبت به گروه بیماری مزمن کبدی داشت.با استفاده از توالی یابی کل ژنوم یک سلول، مشخص شد که CNAها در اوایل سرطان زایی کبد ظاهر می شوند و در طول پیشرفت تومور نسبتاً پایدار می مانند.41 چانگ و همکاران.دریافتند که سطوح cfDNA به طور قابل توجهی در بیماران HCC افزایش یافته است و CNAهای کل ژنوم در cfDNA یک نشانگر پیش آگهی مستقل مهم در بیماران HCC تحت درمان با سورافنیب هستند.42 بیمارانی که بار CNA بالاتری داشتند، نسبت به بیمارانی که بار CNA کمتری داشتند، احتمال بیشتری برای پیشرفت بیماری و مرگ داشتند.اولریچ و همکاراننشان داد که شاخص بی ثباتی تعداد کپی (CNI) می تواند برای ارزیابی CNA در cfDNA بیماران سرطانی استفاده شود.آنها اشاره کردند که بیماران مبتلا به سرطان پیشرفته به طور قابل توجهی نمرات CNI بالاتری نسبت به گروه کنترل داشتند که پاسخ بیمار به شیمی درمانی و ایمونوتراپی سیستمیک را ارزیابی می کند.43 این نتایج نشان می دهد که CNAهای یافت شده در نمونه های بیوپسی مایع ممکن است به عنوان شاخص های پیش آگهی در بیماران مبتلا به سرطان پیشرفته عمل کنند.HCC در زمینه درمان سیستمیک.
در حال حاضر، روش های مورد استفاده برای تشخیص ctDNA را می توان به روش های هدفمند و غیر هدف تقسیم کرد.به طور خلاصه، روش‌های هدفمندی مانند واکنش زنجیره‌ای پلیمراز دیجیتال (dPCR)، BEAMing Digital PCR، Amplification Refractory Mutation System-PCR، Capp-Seq و Tam-Seq به ژن‌های از پیش تعریف‌شده بسیار حساس هستند.روش های خارج از هدف مانند توالی یابی کل ژنوم و NGS یک نمای جامع از کل چشم انداز ژنومی را ارائه می دهند.در مقایسه با پانل‌های هدف، توالی‌یابی کل ژنوم می‌تواند نه تنها جهش‌ها و درج‌های نقطه‌ای، بلکه بازآرایی‌ها و تغییرات تعداد کپی را نیز شناسایی کند.پیش آگهی، و CTC و cfDNA شاخص های خوبی هستند که می توانند برای نظارت پویا HCC مورد استفاده قرار گیرند.علاوه بر این، تجزیه و تحلیل cfDNA ممکن است در تشخیص HCC مفیدتر باشد.یان و همکاراننشان داد که cfDNA در پلاسمای بیماران مبتلا به HCC به طور قابل توجهی بالاتر از بیماران مبتلا به فیبروز کبدی و افراد سالم بود.در مقایسه با AFP، انتظار می رود ctDNA نشانگر غربالگری بهتری برای HCC اولیه باشد.46 در یک مطالعه آینده نگر از 47 نمونه برداری مایع که cfDNA و پروتئین را در جمعیتی آزمایش کردند، نشان داد که آنها در تمایز بیماران مبتلا به HCC از بیماران بدون HCC موثر هستند.در پیگیری 331 بیمار عادی و AFP منفی سونوگرافی، حساسیت و ویژگی cfDNA برای تشخیص HCC به ترتیب 100٪ و 94٪ بود، بنابراین cDNA می تواند HCC را در افراد HBsAg بدون علامت سرم مثبت تشخیص دهد.در مطالعه Yeo48، فرکانس بالایی (92.5٪) از هیپرمتیلاسیون پروموتر RASSF1A در بیماران مبتلا به HCC یافت شد.علاوه بر این، Xu و همکاران.یک مدل تشخیصی برای پیش‌بینی HCC با استفاده از پانل نشانگرهای متیلاسیون خاص با ویژگی و حساسیت به ترتیب 90.5% و 83.3% ایجاد کرد.این پانل به بیماران مبتلا به HCC اجازه می دهد تا از بیماران مبتلا به سایر بیماری های کبدی متمایز شوند که بهتر از AFP است.آنها همچنین دریافتند که کنترل های نرمال که آزمایش آنها مثبت بود ممکن است دارای عوامل خطر برای HCC مانند عفونت HBV یا سابقه مصرف الکل باشند.25 ما فرض می کنیم که عوامل پرخطر برای HCC ممکن است باعث افزایش متیلاسیون cfDNA شود، که سپس به پیشرفت HCC کمک می کند، و بنابراین cfDNA ممکن است نقش کلیدی در غربالگری گروه های پرخطر داشته باشد.کای و همکارانطیف کاملی از جهش‌های ctDNA را خلاصه کنید و یک استراتژی قوی برای ارزیابی بار تومور در بیماران ارائه دهید.49 این استراتژی می تواند تومورزایی را به طور متوسط ​​4.6 ماه قبل از تغییر تصویربرداری شناسایی کند و عملکرد تشخیصی برتر را در مقایسه با بیومارکرهای سرمی AFP، AFP-L3 و PIVKA-II نشان داده است.ارزش تشخیصی آزمایش cDNA زمانی نشان داده شده است که ارزیابی تصویر در دسترس نباشد، بنابراین آزمایش cDNA در تشخیص زودهنگام HCC در گروه‌های پرخطر اهمیت دارد.اخیراً، دانشمندان از فناوری NGS برای تجزیه و تحلیل شاخص‌های تنوع ژنتیکی چند متغیره (شامل 5-هیدروکسی متیل سیتوزین، 5'-موتیف، تکه تکه شدن، ردیابی نوکلئوزوم، HIFI) در 3204 نمونه بالینی و cfDNA استفاده کردند.50 مدل HIFI تأیید شده مجدد با سه مجموعه قطار، آزمایش و آزمایش مستقل، تبعیض پایدار و قابل اعتماد بین جمعیت های HCC و غیر HCC را با حساسیت 95.79٪ و 95.42٪ در مجموعه های تست و آزمایش اختصاصی HCC نشان دادند.جنس ها به ترتیب 00/95 درصد و 83/97 درصد بودند.ارزش تشخیصی روش HIFI بیشتر از AFP در تشخیص HCC از سیروز است.علاوه بر این، ctDNA در درمان جراحی نیز استفاده می شود.آتسوشی و همکارانسطوح سرمی ctDNA قبل از عمل را در بیماران مبتلا به HCC تعیین کرد و دریافت که میزان عود و میزان متاستاز خارج کبدی در گروه cDNA مثبت به طور قابل توجهی بیشتر از گروه cDNA منفی بود و سطوح cDNA به طور قابل توجهی همبستگی داشت.با پیشرفت تومورctDNA به عنوان یک نشانگر زیستی بسیار حساس، می‌تواند توانایی HCC برای حمله به عروق را پیش‌بینی کند.وانگ و همکارانتوالی یابی کل ژنوم 46 بیمار مبتلا به HCC را انجام داد و تجزیه و تحلیل چند متغیره نشان داد که مقدار آستانه فرکانس آللی گونه cDNA برای تهاجم به رگ‌ها 0.83٪، حساسیت 89.7٪ و ویژگی 80.0٪ است.یک عامل خطر مستقل برای تهاجم میکروواسکولار در HCC قابل برداشت، نشان می دهد که cDNA ممکن است به هدایت درمان بهینه کمک کند.در نتیجه، ctDNA به طور کامل در بروز و توسعه HCC نقش دارد و می تواند برای غربالگری زودهنگام، ارزیابی جراحی و نظارت بر بیماری استفاده شود.
CTC ها سلول های بدخیم مشتق شده از تومورهای اولیه یا متاستاز هستند که به جریان خون متاستاز می دهند.سلول‌های تومور متالوپروتئینازهای ماتریکس (MMPs) ترشح می‌کنند که غشای پایه را تجزیه می‌کنند و به سلول‌های تومور اجازه می‌دهند مستقیما وارد خون و عروق لنفاوی شوند.با این حال، اکثر CTC ها به سرعت توسط آنویک، حمله ایمنی یا استرس برشی از بین می روند.انتقال اپیتلیال - مزانشیمی (EMT) به CTCها اجازه می دهد تا به راحتی از بافت تومور اولیه جدا شوند، به مویرگ ها حمله کنند و بقا، متاستاز، تهاجمی و مقاومت دارویی را به طور قابل توجهی بهبود بخشند.مطالعات نشان داده اند که در تومورهای متاستاتیک اولیه، ناهمگونی عمیقی در بین سلول های تومور مختلف وجود دارد.بنابراین، تجزیه و تحلیل CTC می تواند به درک جامعی از ناهمگنی سلول های تومور منجر شود.54
نشانگرهای خاص برای CTC های مرتبط با HCC شامل گلیپیکان-3 (GPC3)، گیرنده آسیالوگلیکوپروتئین (ASGPR)، مولکول چسبندگی سلول های اپیتلیال (EpCAM) و نشانگرهای مرتبط با سلول های بنیادی مانند CD44، CD90، 55 و چسبندگی بین سلولی (ICAM1) است.) .56 نشانگر GPC3 یک پروتئین متصل به غشای سلولی است که از نظر بالینی برای تجزیه و تحلیل پاتولوژیک و تعیین خصوصیات HCC استفاده می شود.بیان GPC3 در سلول‌های تومور HCC با تمایز متوسط ​​و کم شایع‌تر است و باعث مهاجرت خارج کبدی می‌شود.علاوه بر این، وجود CTC های GPC3+ نشان دهنده HCC متاستاتیک است.58 ASGPR یک پروتئین گذرنده است که فقط در سطح سلول های کبدی بیان می شود و در HCC به خوبی تمایز یافته بیان می شود.EpCAM یکی از رایج ترین پروتئین های مرتبط با غشاء برای جذب CTC است.EpCAM به عنوان یک نشانگر سطحی سلول‌های HCC با ویژگی‌های سلول بنیادی شناسایی شده است، که با ویژگی‌های آسیب‌شناسی بالینی مختلف HCC، مانند تهاجم عروقی، سطوح ارزیابی‌شده AFP و مرحله پیشرفته سرطان کبد در بیمارستان بارسلونا (BCLC) مرتبط است.فنوتیپ 60 CTC EMT بسیار متاستاتیک است.54 فرآیند EMT در CTC باعث افزایش متاستاز HCC می شود.بیان نشانگرهای EMT مانند vimentin، twist، E-box zinc finger binding (ZEB) 1، ZEB2، حلزون، اسلاگ و E-cadherin در CTC های مشتق شده از کبد بیماران HCC مورد مطالعه قرار گرفته است.58 سیستم CanPatrol™ توسعه یافته توسط چنگ [61] CTC ها را به سه زیر گروه فنوتیپی بر اساس نشانگرهای عمدتاً بیان شده طبقه بندی کرد: فنوتیپ اپیتلیال (EpCAM، CK8/18/19)، فنوتیپ مزانشیمی (ویمنتین، پیچ خورده)، و فنوتیپ های مخلوط.در 176 بیمار، CTC کل نسبت به AFP در افتراق HCC از بیماری خوش خیم کبد برتر بود.مقادیر AUC برای کل CTC، AFP، و CTC کل و AFP ترکیبی 0.774 (95% CI، 0.704-0.834)، 0.669 (95% CI، 0.587-0.750) و 0.821 (95% CI، 6-0.8، 0.7) بود. ).)، به ترتیب.طبقه‌بندی CTC بر اساس EMT می‌تواند تشخیص HCC، عود زودرس، متاستاز و زمان کلی کوتاه‌تر را پیش‌بینی کند.
در حال حاضر روش های تشخیص CSC ها شامل روش های فیزیکی و روش های بیولوژیکی می باشد.روش‌های فیزیکی که اغلب به عنوان غنی‌سازی بر اساس خواص بیوفیزیکی شناخته می‌شوند، عمدتاً به ویژگی‌های فیزیکی CSC مانند اندازه، چگالی، بار، تحرک و تغییر شکل‌پذیری بستگی دارند.بسته به خواص فیزیکی، روش‌های مختلفی مانند سیستم‌های مبتنی بر فیلتراسیون، دی‌الکتروفورز و غیره وجود دارد. روش دوم، که به عنوان غنی‌سازی مبتنی بر ایمونوفینیتی نیز شناخته می‌شود، عمدتاً مبتنی بر اتصال آنتی‌ژن به آنتی‌بادی است، زیرا این روش از آنتی‌بادی‌ها علیه بیومارکرهای خاص تومور استفاده می‌کند. مانند EpCAM، ASGPR، گیرنده فاکتور رشد اپیدرمی انسانی 2 (HER2)، آنتی ژن اختصاصی پروستات (PSA)، پان سیتوکراتین انسانی (P-CK) و کربامویل فسفات سنتاز 1 (CPS1).62 نوع دیگری به نام روش بدون غنی سازی، از فلوسیتومتری برای تمایز CTC ها از لکوسیت ها بر اساس نسبت هسته به سیتوپلاسمی و اندازه بالاتر استفاده می کند.در حال حاضر، تنها آزمایش مورد تایید FDA برای تشخیص CTC ها، سیستم Cell-Search™ است که از نشانگر سطح سلولی EpCAM استفاده می کند. با این حال، تشخیص CTC مبتنی بر نشانگرهای ترکیبی می‌تواند میزان مثبت بودن را افزایش دهد.54 مخلوطی از آنتی‌بادی‌ها علیه ASGPR و CPS1 به نرخ تشخیص CTC 91 درصد در بیماران HCC دست یافت. -CK و CPS1، و بیماران HCC را از مبتلایان به بیماری خوش خیم کبد یا سرطان غیر HCC با نرخ 100% متمایز کرد. نرخ و تعداد CTC ها با مرحله TNM. 65 Guo و همکاران دریافتند که یک امتیاز PCR مشتق از CTC در 125/171 (73٪) بیمارانی که سطح AFP آنها کمتر از ng / ml 20 با حساسیت 72.5٪ بود، افزایش یافت. ویژگی 95.0% در مقایسه با 57.0% و 90.0% برای AFP در قطع 20ng/mL.66 ترکیب AFP و CTC ممکن است تشخیص HCC را بهبود بخشد. در خطر بالا برای HCC. با این حال، تشخیص CTC مبتنی بر نشانگرهای ترکیبی می‌تواند میزان مثبت بودن را افزایش دهد.54 مخلوطی از آنتی‌بادی‌ها علیه ASGPR و CPS1 به نرخ تشخیص CTC 91 درصد در بیماران HCC دست یافت. -CK و CPS1، و بیماران HCC را از مبتلایان به بیماری خوش خیم کبد یا سرطان غیر HCC با نرخ 100% متمایز کرد. نرخ و تعداد CTC ها با مرحله TNM. 65 Guo و همکاران دریافتند که یک امتیاز PCR مشتق از CTC در 125/171 (73٪) بیمارانی که سطح AFP آنها کمتر از ng / ml 20 با حساسیت 72.5٪ بود، افزایش یافت. ویژگی 95.0% در مقایسه با 57.0% و 90.0% برای AFP در قطع 20ng/mL.66 ترکیب AFP و CTC ممکن است تشخیص HCC را بهبود بخشد. در خطر بالا برای HCC.با این حال، تشخیص ترکیبی CTC بر اساس نشانگر ممکن است درصد نتایج مثبت را افزایش دهد.54 مخلوطی از آنتی بادی های ضد ASGPR و CPS1 نرخ تشخیص CTC 91% را در بیماران مبتلا به HCC به دست آورد.63 Zhang و همکاران.از یک CTC-Chip با آنتی‌بادی‌هایی علیه ASGPR، P-CK و CPS1 استفاده کرد و همچنین بیماران مبتلا به HCC را از بیماران خوش‌خیم کبدی یا غیر HCC به میزان 100% متمایز کرد.ساعت و количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo and soaвторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный од ЦОК, был повышен во 125/171 (73%) پشینتوف, در کوتورых 7/2% احساس می شود. و تخصصی بودن 95,0% با صراحت با 57,0% و 90,0% برای AFP با استفاده از 20 ng/ml.66 Combinaciya AFP و COK می تواند به طور کامل از AFP و COK استفاده کند. گروهп. فرکانس و تعداد CTCها با مرحله TNM.65 Guo و همکاران دریافتند که PCR مشتق شده از CTCها در 125/171 (73%) بیمارانی که سطوح AFP کمتر از ng/mL 20 با حساسیت 72.5 درصد و ویژگی داشتند افزایش یافته است. 95.0% در مقایسه با 57.0% و 90.0% برای AFP در سطح برش 20 نانوگرم بر میلی لیتر. گروه ها.با خطر بالای HCC.با این حال، تشخیص ترکیبی مبتنی بر نشانگر CTC ها ممکن است درصد نتایج مثبت را افزایش دهد.54 مخلوطی از آنتی بادی های ضد ASGPR و CPS1 نرخ تشخیص CTC 91% را در بیماران مبتلا به HCC به دست آورد.63 ژانگ و همکاران.از تراشه های CTC با آنتی بادی علیه ASGPR، P-CK و CPS1 استفاده کرد و بیماران مبتلا به HCC را از بیماری های کبدی خوش خیم و غیر HCC با 100% متمایز کرد.64 مطالعه وانگ 60 درصد از CTC های EpCAM+ را در 42 بیمار HCC شناسایی کرد و ارتباط معنی داری بین بروز و تعداد CTC ها در مرحله TNM پیدا کرد. 65 Guo 等人发现，在AFP 水平<20 ng/mL 的125/171 (73%) 名患者中，CTC 衍生的PCR 评分升高，敏感性为72.5%，特异性为95.0%，而AFP 在截止20 نانوگرم در میلی لیتر 时的特异性为57.0٪ 和90.0٪. 65 Guo 等 人 发现 在 在 在 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 ， ， ctc 衍生 pcr 评分 ， 敏感性 为 为 72.5%， 为 95.0%， AFP 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值 为 为 20ng/ml 时 的 为 为 为 为 57.0 ٪ 和 90.0 ٪。65 گوو و همکاران.تغییر در 125/171 (73%) با احساس AFP <20 ng/ml ارزش PCR، با کمک به COK، با احساسی بودن 72.5% و کیفیت بالای 95% отсечки Специфичность составляла 20 нг/мл. نشان داد که در 125/171 (73٪) بیماران با سطوح AFP <20 نانوگرم در میلی لیتر، مقادیر PCR مشتق از CTC با حساسیت 72.5٪ و ویژگی 95.0٪ بالا بود، در حالی که AFP در ویژگی قطع بود. 20 نانوگرم در میلی لیتر بود.میلی لیتر 57.0٪ و 90.0٪ بود.66 ترکیب ORP و CTC تشخیص HCC را بهبود می بخشد.تصور می شود که 45 CTC در غربالگری اولیه جمعیت های پرخطر HCC نسبت به AFP برتری دارند.بنابراین، برای گروه‌های HCC مثبت و پرخطر، آزمایش CTC باید به طور معمول با سونوگرافی و تشخیص AFP ترکیب شود.با این حال، CTC ها پیش بینی کننده مهم متاستاز و عود تومور در نظر گرفته می شوند و تشخیص CTC به طور مستقل به عنوان یک ابزار تشخیصی توصیه نمی شود.بنابراین، CTC ممکن است به‌عنوان نشانگر زیستی پیش‌بینی‌کننده بهتری نسبت به سایر نشانگرهای مورد استفاده فعلی عمل کند. ژو و همکاران دریافتند که بیماران با تعداد بالای CTC های EpCAM+ و سلول های T تنظیمی، نسبت به بیماران با تعداد کم CTC با نسبت عود 66.7 درصد در مقابل 10.3 درصد، خطر بیشتری برای ابتلا به عود HCC نشان دادند (P <0.001). مطالعه مشابهی توسط ژونگ و همکاران گزارش شد.68 بعلاوه، Qi دریافت که 101 نفر از 112 بیمار (90.81٪) مبتلا به HCC، از جمله بیمارانی که در مراحل اولیه بیماری بودند، برای CTC مثبت بودند و ندول های بسیار کوچک HCC بعد از 3 مورد شناسایی شدند. تا 5 ماه پیگیری ژو و همکاران دریافتند که بیماران با تعداد بالای CTC های EpCAM+ و سلول های T تنظیمی در مقایسه با بیماران با تعداد کم CTC با نسبت عود 66.7% در مقابل 10.3% خطر بیشتری برای ابتلا به عود HCC نشان دادند (P<0.001). مطالعه مشابهی توسط Zhong و همکاران گزارش شد.68 علاوه بر این، Qi دریافت که 101 نفر از 112 بیمار (90.81٪) مبتلا به HCC، از جمله آنهایی که بیماری در مراحل اولیه داشتند، برای CTC مثبت بودند و ندول های بسیار کوچک HCC بعد از 3 تا شناسایی شدند. 5 ماه پیگیری. چژو و د.غیرفعال کردن، چه در مورد مصرف کنندگان با مقدار کمی رنگ COK EpCAM+ و تنظیم کننده T-kletok خطر افزایش پاسخ GCK بیش از حد، هر چه میزان مصرف آن با کمترین میزان نسبت به مقدار کمتر باشد (P60,7% <60,7%) ژو و همکاران دریافتند که بیماران با CTC های EpCAM+ و سلول های T تنظیمی در معرض خطر بیشتری برای عود HCC نسبت به بیماران با CTC پایین، با نرخ عود 66.7% در مقابل 10.3% (P<0.001)67 بودند.مطالعه مشابهی توسط Zhong و همکاران انجام شد.68. علاوه بر این، Qi دریافت که 101 از 112 بیمار (90.81٪) مبتلا به HCC، از جمله مبتلایان به بیماری اولیه، CTC داشتند و ندول های بسیار کوچک HCC پس از 3 تا 5 ماه پیگیری تشخیص داده شدند. Zhou 等人发现，与CTC 数量较少的患者相比，EpCAM+ CTC 和调节性T 细胞数量升高的患者发生HCC 复发的风险更高，复发率分别为66.7% 和10.3% (P < 0.001)。 Zhou 等 人 发现 与 与 ctc 数量 少 的 患者 相比 ， epcam+ ctc 和 t 细胞 数量 的 患者 发生 hcc 复发 风险 更 ， 复发率 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 10.3% ( p <0.001) ....... چژو و د.обнаружили، что пациенты со повышенным количеством ЦОК EpCAM+ و تنظیم کننده تی-کلتوک نامی بیشتر از خطر پذیری GЦК با رگباری با ناهنجاری با کمترین میزان با کمتر از 3،6%، 1%، 1% و 60% <3، 6% و 60% . ژو و همکاراندریافتند که بیماران با CTC های EpCAM+ و سلول های T تنظیمی در مقایسه با بیمارانی که CTC های کمتری داشتند، با میزان عود به ترتیب 7/66 و 3/10 درصد، خطر بیشتری برای عود HCC داشتند (001/0 > P).مطالعه مشابهی توسط ژونگ و همکاران گزارش شده است.68 علاوه بر این، Qi دریافت که 101 نفر از 112 بیمار HCC (90.81٪)، از جمله بیماران مبتلا به بیماری اولیه، نتایج CTC مثبت داشتند و بعد از 3 بازدید، ندول های HCC بسیار کوچکی را پیدا کردند.مشاهده تا 5 ماه.آنها همچنین CTC را در 12 بیمار مبتلا به عفونت مزمن HBV و تومورهای کوچک HCC را در عرض 5 ماه در 2 بیمار CTC مثبت پیدا کردند.بنابراین، CTC ها را می توان برای پیش بینی HCC، 70 استفاده کرد، اما می توان آنها را به طور معمول به عنوان نشانگرهای زیستی پیش بینی کننده استفاده کرد.
مانند cfDNA، cfRNA از طریق سیستم های مختلف به جریان خون آزاد می شود.این مولکول ها در خون محیطی نشان دهنده بافت سرطانی منشا هستند.در مقایسه با نشانگرهایی که با روش‌های غیر تهاجمی شناسایی می‌شوند، cfRNA‌ها به‌صورت دینامیکی تنظیم‌شده‌تر، بافت خاص‌تر و در محیط خارج سلولی فراوان‌تر هستند.اهمیت و ارزش تشخیصی 71 miRNA (miRNAs) در HCC در بسیاری از مطالعات گزارش شده است.miRNA ها RNA های غیر کد کننده درون زا (ncRNAs) هستند که فعالیت های بیولوژیکی مولکولی مختلف را با مهار ترجمه RNA های پیام رسان هدف (mRNAs) تنظیم می کنند.miRNA ها در اجسام آپوپتوز محصور شده در اگزوزوم ها قرار دارند، اما همچنین می توانند به طور پایدار به پروتئین ها و لیپیدهای سرم در خون محیطی متصل شوند و می توانند برای ارزیابی HCC استفاده شوند.microRNA ها در بازسازی کبد، متابولیسم لیپیدها، آپوپتوز، التهاب و ایجاد HCC نقش دارند.72 miRNA های سرطان زا مانند miR-21، miR-155 و miR-221 در HCC به خوبی شناخته شده اند.به طور خاص، miR-21 نقش کلیدی در سنتز کلاژن در ماتریکس خارج سلولی و فیبروز دارد و با فعال کردن سلول‌های بنیادی خونساز، سرطان‌زایی کبد را ارتقا می‌دهد.72،73 miRNA های سرکوبگر تومور در HCC شامل miRNA-122، miRNA-29، خانواده Let-7 و خانواده miRNA-15 است.خانواده Let-7 شامل بسیاری از miRNA های سرکوبگر تومور است که خانواده RAS را هدف قرار می دهد.خانواده miR-15 شامل miR-15a، miR-15b، miR-16، miR-195 و miR-497 است که دارای توالی های مکمل برای mRNA های خاص هستند.علاوه بر این، RNA های طولانی غیر کد کننده (lncRNAs) و RNA های حلقوی (cirRNAs) نیز برای غربالگری اولیه HCC مهم هستند.lncRNA ها گسترده ترین کلاس ncRNA ها از جمله ncRNA های شبه mRNA را نشان می دهند و در پاتوژنز بسیاری از بیماری های انسانی نقش دارند.LncRNA ها نقش تنظیمی در ریزمحیط کبد و بیماری مزمن کبد ایفا می کنند.74 CircRNA ها نیز دسته ای از ncRNA ها با عملکردهای متعدد در تنظیم بیان ژن هستند.اخیراً، circRNA ها به عنوان ابزار تشخیصی برای HCC در نظر گرفته شده اند.
RNA آزاد در گردش پایداری قابل توجهی از جمله مقاومت در برابر دما، pH و RNase دارد که جداسازی fnRNA از خون محیطی را با استفاده از روش‌های استاندارد خالص‌سازی RNA خسته‌کننده‌تر می‌کند.متداول ترین روش های مورد استفاده عبارتند از NGS، ریزآرایه و RT-qPCR.NGS به microRNA ها اجازه می دهد تا در سراسر ژنوم اندازه گیری شوند.با این حال، این روش گران است و تجزیه و تحلیل استاندارد نیست.در مقابل، RT-qPCR ارزان است، به سرعت اسیدهای نوکلئیک را تقویت می کند و مزایای زیادی مانند حساسیت بالاتر، دقت بالاتر، محدوده دینامیکی گسترده تر، و نیاز به نمونه های کمتر را ارائه می دهد.ریزآرایه ها روش دیگری است که برای تشخیص miRNA بر اساس هیبریداسیون حساس و اختصاصی miRNA های هدف با پروب های DNA مکمل استفاده می شود، اما تجزیه و تحلیل داده های ریزآرایه زمان بر است.
گزارش شده است که miR-122 و Let-7 در گردش به طور بالقوه در تشخیص HCC در مراحل اولیه در گروه های پرخطر، نشانگرها در بیماران مبتلا به ندول های پیش بدخیم مرتبط با HBV و HCC در مراحل اولیه مفید هستند.76 کای و همکاران.دریافتند که اعضای خانواده Let-7 (miR-92، miR-122، miR-125b، miR-143، miR-192، miR-16، miR-126، و miR-199a/b) در معرض خطر ابتلا به بیماری مزمن هستند. HCC در بیماران مبتلا به هپاتیتخانواده Let-7 می تواند به عنوان یک نشانگر زیستی جایگزین موثر برای پیش بینی توسعه HCC در گروه های پرخطر مرتبط با هپاتیت C مزمن عمل کند. 77 miR-122 دارای دقت تشخیصی بالایی در تشخیص زودهنگام HCC در بیماران مبتلا به سیروز کبدی است.78 سرم MiR-107 در گردش نیز در مراحل اولیه HCC، 79 مورد ارزیابی قرار گرفته است و پتانسیل خوبی را در جمعیت های پرخطر نشان داده است.ژو و همکاران گزارش کردند که پانلی از miRNA ها (miR-122، miR-192، miR-21، miR-223، miR-26a، miR-27a و miR-801) می توانند HCC را از هپاتیت B مزمن (CHB) و سیروز متمایز کنند. حساسیت به ترتیب 79.1% و 75% و ویژگی 76.4% و 91.1% بود.80 در HCC مرتبط با HBV، ما دریافتیم که سطوح miR150 در مقایسه با بیماران مزمن HBV بدون HCC (حساسیت 79.1٪، ویژگی 76.5٪) به طور قابل توجهی کاهش یافته است.-224 در HCC در مقایسه با افراد سالم افزایش یافته بود، و تجزیه و تحلیل های زیرگروه سطوح بالاتری را در بیماران مبتلا به HCC مرتبط با HBV نشان داد.بیماران سیروز مرتبط با هپاتیت B و HCC یک طبقه‌بندی کننده siRNA حاوی هفت siRNA با بیان متفاوت را شناسایی کردند که می‌تواند HCC را در کنترل‌های مختلف تشخیص دهد.محدوده AUC در غربالگری اولیه بهتر از داوطلبان AFP است.آنها دریافتند که چهار miRNA (miR-1972، miR-193a-5p، miR-214-3p و miR-365a-3p) می توانند بیماران مبتلا به HCC را از بیماران بدون HCC متمایز کنند.پنج miRNA با بیان بیش از حد (miR-122-5p، miR-125b-5p، miR-885-5p، miR-100-5p، و miR-148a-3p) عفونت‌های بالقوه HBV در HCC، سیروز، و نشانگرهای زیستی CHB در نظر گرفته می‌شوند. miR-34a-5p ممکن است نشانگرهای زیستی برای سیروز کبدی باشد، 85 و ممکن است نشانگرهای زیستی بالقوه برای غربالگری اولیه HCC در جمعیت های پرخطر باشد.lncRNA مورد مطالعه در HCC به شدت در سرطان کبد (HULC) فعال می شود.مطالعات دیگر نشان داده اند که HULC در حال گردش در بیماران HCC می تواند به عنوان یک نشانگر تشخیصی استفاده شود زیرا این lncRNA در بیماران HCC در مقایسه با افراد سالم به شدت افزایش می یابد.71،86 در میان سایر lnRNA ها، LINC00152 به دلیل AUC، حساسیت و ویژگی بالا، بهترین lncRNA تشخیصی در نظر گرفته می شود.86 در یک مطالعه، بیان خون محیطی LINC00152 به تدریج از افراد سالم سالم به بیماران مبتلا به CHB و سیروز افزایش یافت و در نهایت در HCC بالاترین میزان بود.مطالعات بیان circSMARCA5 در پلاسمای بیماران مبتلا به HCC کاهش تدریجی بیان HCC را از هپاتیت تا سیروز و ضایعات پیش سرطانی نشان داده است.87 تجزیه و تحلیل منحنی های ROC پتانسیل این circRNA ها را در تشخیص بیماران مبتلا به هپاتیت یا سیروز کبدی از بیماران مبتلا به HCC، به ویژه آنهایی که سطح AFP کمتر از 200 نانوگرم در میلی لیتر دارند، تایید کرد.علاوه بر این، ژو 13617 RNA حلقوی را در نمونه‌های پلاسما از بیماران HCC مرتبط با HBV تجزیه و تحلیل کرد و تأیید کرد که 6 RNA حلقوی در سیروز HCC و HBV مرتبط با هم متفاوت بیان می‌شوند که نشان می‌دهد cRNA‌ها ممکن است مفید باشند.نشانگرهایی برای غربالگری زودهنگام گروه‌های پرخطر مانند گروه‌های مرتبط با بیماری‌های کبدی، بیماران اسکلروزیس.88
اگزوزوم ها وزیکول های غشایی با قطر 40 تا 160 نانومتر هستند.چندین وزیکول درون سلولی با غشای سلولی ترکیب شده و به درون ماتریکس خارج سلولی رها می شوند.آنها حاوی بسیاری از اجزای فعال از جمله لیپیدها، پروتئین ها، RNA و DNA هستند و نقش کلیدی در ارتباط بین سلول ها، اعم از سلول های HCC و غیر HCC دارند.89،90 اگزوزوم‌ها با فعال کردن فیبروبلاست‌های کبدی و سلول‌های ستاره‌ای، سلول‌های ایمنی، سلول‌های کبدی طبیعی و سلول‌های HCC، پیشرفت HCC را تنظیم می‌کنند.91 در ریزمحیط تومور، سلول‌های تومور تعداد زیادی اگزوزوم تولید می‌کنند که از سلول‌های سرطانی به سلول‌های نابالغ منتقل می‌شوند، که به نوبه خود در انکوژن، تخریب و سیگنال‌دهی سلولی نقش دارند.مطالعات نشان داده اند که اگزوزوم ها می توانند انکوژن ها را طی فرآیندهای پاتولوژیک به سلول های طبیعی منتقل کنند که ممکن است یکی از مکانیسم های تهاجم و متاستاز تومور باشد.نقش اگزوزوم‌ها در پیشرفت سرطان ممکن است پویا و مختص نوع سرطان باشد. واسطه سیگنالینگ سلولی و متابولیسم.94 ویژگی ها و تغییرات دینامیکی مولکول های محموله اگزوزوم به طور مستقیم منعکس کننده ویژگی ها و تغییرات دینامیکی سلول های تومور والدین است، که همچنین مبنایی برای استفاده از اگزوزوم ها در تشخیص و پیش آگهی سرطان و همچنین برای پیش بینی پاسخ فردی به درمان ضد سرطان است. ..96
روش‌های آزمایشگاهی سنتی برای جداسازی و آنالیز اگزوزوم‌ها پیچیده، چند مرحله‌ای و زمان‌بر هستند، از جمله اولتراسانتریفیوژ، فیلتراسیون، کروماتوگرافی حذف اندازه، خالص‌سازی ایمنی، وسترن بلات، سنجش ایمونوسوربنت متصل به آنزیم (ELISA)، آنالیز PCR و جریان.سیستم‌های کوچک و پلت‌فرم‌های آزمایشگاهی روی تراشه با استفاده از فناوری میکرو/نانو به طور گسترده برای جداسازی سریع و راحت در محل اگزوزوم‌ها توسعه می‌یابند.تجزیه و تحلیل ردیابی نانوذرات (NTA) یک روش پرکاربرد برای تعیین اندازه و غلظت اگزوزوم ها، از جمله روش هایی مانند نانوذرات مغناطیسی و پلی هیدروکسی آلکانوات ها است.روش های میکروسیال و الکتروشیمیایی نیز می توانند به سرعت اگزوزوم ها را در بازده بالا تشخیص دهند.
پروتئین های اگزوزومی نشانگرهای مهمی برای تشخیص HCC هستند.در مطالعه Arbelaiz، سطح پروتئین اتصال 98 RasGAP SH3 (G3BP) و گیرنده ایمونوگلوبولین پلیمری (PIGR) به طور قابل توجهی در اگزوزوم های مشتق شده از HCC بالا بود و اثر ترکیبی فرضی این دو پروتئین نسبت به AFP برتر بود.اضافه بار آهن یک عامل مهم در توسعه HCC است.Tseng گزارش داد که هپسیدین ممکن است نقش کلیدی در مقاومت به HCC داشته باشد.99 اگزوزوم مشتق شده از سرم بیماران HCC دارای تعداد کپی قابل توجهی از انواع mRNA هپسیدین نسبت به همتایان سالم خود بودند، که نشان می دهد هپسیدین ممکن است نشانگر زیستی تشخیصی جدیدی برای HCC باشد.پروتئین 14-3-3ζ در اگزوزوم های تولید شده توسط 100 HCC می تواند فعال سازی، تکثیر و تمایز سلول های T را کاهش دهد و می تواند تبدیل سلول های T را به سلول های T تنظیمی القا کند و در نتیجه سلول های T را تخلیه کند.101 این توسط چندین مطالعه در مورد بررسی فرار تومور از نظارت ایمنی، 102 که ممکن است به تومورزایی HCC کمک کند، پشتیبانی می شود.
علاوه بر وجود ecRNA در پلاسما یا سرم، اگزوزوم‌های غنی‌شده با RNA را می‌توان برای مرحله‌بندی بلادرنگ غیرتهاجمی در غربالگری اولیه تومور و تعیین تکامل تومور و پاسخ به درمان استفاده کرد.سطح miRNA-21 اگزوزومی در سرم خون در گروه HCC 2.21 برابر بیشتر از گروه CHB و در گروه HCC 5.57 برابر بیشتر از جمعیت سالم بود.در مطالعه وانگ، اگزوزوم ها به طور قابل توجهی HCC را در مقایسه با بیماران سیروز با مقادیر AUC 0.83 (95% فاصله اطمینان (CI): 0.74-0.93) و 0.94 (95% CI 0.88-1.00) افزایش دادند.104 داده های به دست آمده دخالت مولکول های محموله اگزوزومی خاص را در تنظیم انکوژنز و پیشرفت HCC روشن کرد.105 بیان سرمی miR-221، miR-103، miR-181c، miR-181a، miR-93 و miR-26a سازگار است.و سطح متاستاز و miR21 در بیماران HCC بسیار بالاتر از افراد سالم و همچنین در بیماران CHB بود. LncRNA 102 دارای ارزش تشخیصی بالقوه در HCC بود.مطالعات نشان داده اند که اگزوزوم های مشتق شده از سرم بیماران HCC دارای سطوح قابل توجهی بالاتری از LINC00161، LINC000635 و lncRNA هستند که با تبدیل فاکتور رشد-β فعال می شوند تا در بیماران بدون HCC، و این lncRNA ها به شدت با مرحله TNM و حجم تومور مرتبط هستند.110 Conigliaro و همکاران.اگزوزوم‌های CD90+ سطوح بالایی از lncRNAH19 را بیان می‌کنند که به طور قابل‌توجهی آزادسازی فاکتور رشد اندوتلیال عروقی (VEGF) و تولید گیرنده VEGF-R1 را افزایش می‌دهد و در نتیجه رگ‌زایی را تحریک می‌کند.93 CircRNA ها نوع دیگری از ncRNA های اگزوزومی هستند - که در سطوح پایین تر اما پایدار در بین گونه ها بیان می شوند، circRNA ها همچنین برای نوع سلول، نوع بافت، مرحله رشد و فعالیت تنظیمی ویژگی نشان می دهند.111 circRNA نشانگرهای زیستی تشخیصی برای سرطان زودرس و کم تهاجمی هستند.112 کارآزمایی های بالینی اخیر نشان داده اند که ویژگی miRNA های فردی در پیش بینی HCC ایده آل نیست.بنابراین، تشخیص پیچیده با استفاده از سنجش های متعدد (مثلا miR-122 و miR-48a در ترکیب با AFP) ممکن است شناسایی HCC اولیه و تمایز HCC از سیروز را بهبود بخشد.100
بیماران مبتلا به CHB و سیروز کبدی شایع ترین گروه پرخطر برای ابتلا به HCC هستند.برای گروه های پرخطر، هنگامی که پاسخ ویروسی پایدار به دست آمد، باید یک استراتژی نظارتی مقرون به صرفه بر اساس خطر HCC ایجاد شود، و غربالگری زودهنگام کلید بهبود تشخیص و درمان HCC با نسبت هزینه اثربخشی بالا است. ..روش‌های غربالگری زودهنگام سرطان محدودیت‌های زیادی دارند: روش‌های غربالگری زودهنگام مؤثر برای اکثر انواع سرطان توسعه نیافته‌اند و معمولاً پایبندی آن کم است.در مقایسه با روش‌های غربالگری اولیه سنتی، فناوری بیوپسی مایع مزایای آشکاری دارد: سهولت نمونه‌گیری، تشخیص panrac، تکرارپذیری خوب نمونه، و پاسخ مؤثر به ناهمگنی تومور.با توجه به مقرون به صرفه بودن روش های مرتبط با بیوپسی مایع، استفاده از آنها در غربالگری HCC به طور معمول آزمایش نشده است.با وجود پیشرفت‌هایی که در تشخیص دقیق در سطح مولکولی صورت گرفته است، بیوپسی مایع برای تشخیص HCC در بیماران هدف پرهزینه است و استفاده گسترده از آن را در مقایسه با روش‌های تصویربرداری خاص مانند اولتراسوند و تصویربرداری رزونانس مغناطیسی محدود می‌کند.113,114 با این حال، یک مطالعه قبلی نشان داد که بیوپسی مایع مزایای قابل توجهی را از نظر سالهای زندگی تنظیم شده با کیفیت (QALYs) نشان داد.115 فواید بیوپسی مایع در سرطان اولیه معده و نازوفارنکس نیز نشان داده شده است.دیدگاه فعلی این است که بیوپسی مایع می‌تواند بیومارکرهای سرم و غربالگری رادیولوژیک را در تشخیص و تشخیص تومورها تکمیل کند.117 118
با توجه به ادبیات فعلی، فناوری بیوپسی مایع حساسیت و ویژگی به طور قابل توجهی بالاتری را در غربالگری اولیه گروه های پرخطر برای سرطان کبد نشان داده است.صرف نظر از نوع بیوپسی مایع، می تواند HCC را از افراد پرخطر بدون HCC متمایز کند، که نشان دهنده اهمیت غربالگری زودهنگام است زیرا تفاوت بین افراد پرخطر و افراد سالم مشهود است.ctDNA نیمه عمر کوتاهی دارد و می توان از آن برای تشخیص HCC استفاده کرد، بنابراین هرگونه تغییر در cDNA مشتق از تومور می تواند شواهد عینی در زمان واقعی از پیشرفت تومور، به ویژه برای تومورهای کوچک ارائه دهد.سطح بالای ctDNA نشان دهنده توسعه و گسترش سرطان است و نشانگر اولیه پیشرفت و عود است.علاوه بر این، بر اساس نتایج ctDNA، بیماران می توانند درمان و پیگیری فردی را دریافت کنند.119 مکان‌های متیلاسیون خاص ممکن است نشانگر بهتری نسبت به AFP برای شناسایی زودهنگام HCC و گره‌های سیروز باشد.در موارد قابل برداشت HCC، سطوح بالای cDNA نشان دهنده تهاجم میکروواسکولار و عود و متاستاز بعد از عمل است.تغییرات در تعداد کپی با بقای بیماران مبتلا به HCC مرتبط است.می توان فرض کرد که ارزیابی cDNA ممکن است در درمان کلی HCC دخیل باشد و cDNA می تواند به عنوان یک شاخص موثر برای مدولاسیون درمانی عمل کند.نشانگرهای مبتنی بر جهش‌های ژنتیکی خاص در ctDNA توسط دستورالعمل‌های بالینی برای پیش‌بینی اثربخشی و نظارت بر مقاومت دارویی اتخاذ شده‌اند.آزمایش ctDNA ممکن است مفیدترین ابزار بیوپسی مایع برای غربالگری اولیه باشد.CTC ها همچنین نقش کلیدی در غربالگری اولیه گروه های پرخطر HCC دارند.نشانگرهای مختلف CTC های مرتبط با HCC در شروع، توسعه و عود HCC اهمیت ویژه ای دارند.اگزوزوم ها به عنوان وزیکول های غشایی در ارتباطات بین سلولی به ویژه در سلول های HCC نقش دارند.microRNAهای در گردش در خون پایدار هستند و بنابراین ممکن است برای غربالگری اولیه HCC مفیدتر باشند.به تدریج، پروتئین های اگزوزومی و اگزوزوم های غنی از RNA کشف شدند و اثربخشی پیش بینی کننده آنها برای HCC تأیید شد.جالب توجه است که علل مختلف HCC نیز ممکن است با جهش‌های مختلف همراه باشد، بنابراین ما می‌توانیم نشانگرهای زیستی مختلفی را برای غربالگری اولیه بر اساس علل مختلف HCC انتخاب کنیم.120
با این حال، تکنیک‌های بیوپسی مایع فعلی از نظر پایداری مشکوک هستند و نمی‌توانند به طور مستقل غربالگری یا نظارت اولیه HCC را انجام دهند، اما همچنان می‌توانند غربالگری و تشخیص فردی را تکمیل کنند.121 به عنوان نوعی بیوپسی مایع، تشخیص و تصویربرداری از ctDNA، CTC، cfRNA و AFP یا PIVKA-II مرتبط با اگزوزوم کاربردهای امیدوارکننده‌ای در تشخیص و پیش‌آگهی اولیه HCC دارد.با این حال، مکانیسم دقیق انتشار ctDNA در خون هنوز مشخص نیست.آشکار کردن خواص بیولوژیکی اولیه ctDNA ممکن است استفاده از آن را به عنوان نشانگر تسهیل کند.مقدار کمی ctDNA در گردش خون و الزامات دقیق حمل نمونه چالش‌هایی برای اجرای بالینی تشخیص cDNA در HCC است.علاوه بر این، جهش های ژنتیکی ویژگی های خاصی ندارند که امکان شناسایی دقیق عوامل سرطان زا را فراهم کند.از آنجایی که چندین گونه ژنتیکی و سوماتیکی نیز در بافت‌های طبیعی وجود دارد، جهش‌های ژنتیکی شناسایی‌شده با بیوپسی مایع ممکن است در غربالگری اولیه برای HCC مفید باشد.122 محدودیت‌های اهداف ژنی مفید و نشانگرهای زیستی که به تمایز cDNA از DNA غیر توموری کمک می‌کنند، مهم‌ترین مسائل در استفاده از cDNA هستند.عدم سودمندی نشانگرهای حساس و اختصاصی برای تشخیص CTC.تنها سلول‌های زنده با پتانسیل متاستاتیک یافت شدند و ترکیب بهینه نشانگرهای غنی‌شده CSC نامشخص بود.جداسازی CTC ها برای کشت و ارزیابی پروفایل های جهش آنها نیز یک کار چالش برانگیز است.به دلیل مشکلات شناسایی، جداسازی و خالص‌سازی اگزوزوم‌ها، مکانیسم مولکولی خاص هنوز نامشخص است و مطالعات قبلی در مورد مکانیسم اگزوزوم‌ها و HCC عمیق نبوده است، و نحوه طبقه‌بندی miRNA‌ها، lncRNA ها و پروتئین‌ها به اگزوزوم‌ها. و مشخص نیست که آیا جذب اگزوزوم یک فرآیند خاص است یا خیر.استفاده از اگزوزوم برای تشخیص و درمان HCC هنوز در مرحله پیش بالینی است.استاندارد نبودن روش‌های بیوپسی مایع، مانند نوع لوله‌های مورد استفاده برای جمع‌آوری خون، حجم خون، ذخیره‌سازی و شناسایی نمونه، جداسازی و غنی‌سازی، ممکن است به دلیل تفاوت در شیوه‌ها در مراکز پزشکی، استفاده از آن‌ها را در عمل معمول بالینی منع کند.اثربخشی بیوپسی مایع در غربالگری زودهنگام، تشخیص، ارزیابی اثربخشی و پیش‌بینی HCC، به‌ویژه برای گروه‌های پرخطر، هنوز قابل بررسی است.فناوری بیوپسی مایع پتانسیل بالایی دارد و انتظار می رود در آینده نزدیک به طور گسترده در عمل بالینی سرطان کبد مورد استفاده قرار گیرد.
1. سانگ اچ.، فورلی جی.، سیگل RL و همکاران.آمار جهانی سرطان 2020: GLOBOCAN میزان بروز و مرگ و میر را از 36 نوع سرطان در 185 کشور تخمین می زند.CA سرطان جی کلین.2021؛ 71 (3): 209-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. مقر کمیسیون بهداشت ملی.معیارهای تشخیص و درمان سرطان اولیه کبد (ویرایش 2022) [J].مجله بیماری های کبدی بالینی، 2022، 38 (2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J، Sun H، Wang Z، و همکاران.راهنمای تشخیص و درمان سرطان کبد (نسخه 2019).سرطان کبد.2020؛ 9 (6): 682-720.doi: 10.1159/000509424
4. Kokudo N، Takemura N، Hasegawa K، و همکاران.دستورالعمل های عمل بالینی برای سرطان کبد: انجمن ژاپنی برای بیماری های کبد، 2017 (راهنمای چهارم JSH-HCC)، به روز رسانی 2019.مخزن بیماری کبد.2019؛ 49 (10): 1109-1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA، Fernandez-Garza LE، Barrera-Barrera SA بیوپسی مایع در بیماری مزمن کبد.آن هپاتو2021؛ 20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.بیوپسی مایع سرطان سینه: یک بررسی متمرکزArch Pathol Lab Med.2021؛ 145 (6): 678-686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F.، Singal AG Surveillance برای سرطان کبد: بهترین شیوه های فعلی و جهت گیری های آینده.گوارش.2019؛ 157 (1): 54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. انجمن تحقیقات اروپایی L، سازمان اروپایی R، C Therapeutics.دستورالعمل های بالینی EASL-EORTC: درمان کارسینوم سلول های کبدی.جی هپارین.2012؛ 56 (4): 908-943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G.، Ha SA، Kim HK و همکاران.تجزیه و تحلیل ترکیبی AFP و HCCR-1 به عنوان نشانگرهای سرولوژیکی مفید در کارسینوم کبدی کوچک: یک مطالعه کوهورت آینده نگر.دیس مارک.2012؛ 32 (4): 265-271.doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. چن اس، چن اچ، گائو اس، و همکاران.بیان متفاوت microRNA-125b پلاسما در بیماری کبدی مرتبط با ویروس هپاتیت B و پتانسیل تشخیصی کارسینوم کبدی ناشی از ویروس هپاتیت B.مخزن بیماری کبد2017؛ 47 (4): 312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR، Foster F.، Kudo M. et al.بیولوژی و اهمیت آلفا فتوپروتئین در کارسینوم کبدیکبد داخلی2019؛ 39 (12): 2214-2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M، Cheng AL، Kokudo N، و همکاران.دستورالعمل های بالینی برای درمان سرطان کبد در منطقه آسیا و اقیانوسیه: به روز رسانی 2017.سازمان بین المللی بیماری های کبدی2017؛ 11 (4): 317-370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. شو فی، ژانگ لی، هه وی و همکاران.ارزش تشخیصی سرم PIVKA-II به تنهایی یا در ترکیب با AFP در بیماران چینی مبتلا به کارسینوم سلولی کبدی.دیس مارک.2021; 2021: 8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. دورین ال.، پررادینز ا.، باست اس و همکاران.سرطان ریه سلول غیر کوچک بیوپسی مایع هومورال غیر پلاسما: نزدیکتر به تومور!سلول.2020؛ 9 (11).doi: 10.3390/cells9112486
15. Mader S, Pantel K. بیوپسی مایع: وضعیت فعلی و چشم انداز آینده.درمان Oncol Res.2017؛ 40 (7-8): 404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R، Lovero D، Cafforio P، و همکاران.بیوپسی سرطان مبتنی بر مایع: یک ابزار تشخیصی چندوجهی در انکولوژی بالینیAdv Med Oncol.2018; 10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. اسیدهای نوکلئیک در پلاسمای انسان.CR Seances Soc Biol Fil.1948؛ 142 (3-4): 241-243.
18. Mouliere F، Chandrananda D، Piskorz AM، و همکاران.تشخیص پیشرفته DNA تومور در گردش با تجزیه و تحلیل اندازه قطعهعلم پزشکی را ترجمه می کند.2018؛ 10:466.doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR، Kitzman JO، Hellwig C. et al.طول قطعه DNA تومور در گردشژن های PLOS2016؛ 12 (7): e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. DNA تومور در گردش: یک نشانگر زیستی امیدوارکننده در بیوپسی سرطان مبتنی بر مایع.تومور هدف2016؛ 7 (30): 48832-48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S.، Sauzen M.، Leary RJ و همکاران.تشخیص DNA تومور در حال گردش در مراحل اولیه و اواخر بدخیمی های انسانیعلم پزشکی را ترجمه می کند.2014؛ 6 (224): 224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. بیوپسی مایع برای تجزیه و تحلیل پیشگویانه جهشی سرطان جامد: دیدگاه یک آسیب شناس.J بیوتکنولوژی.2019؛ 297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, et al.تشخیص زودهنگام تومور با غربالگری DNA پلاسما در گردش: هیاهو یا امید؟قانون بالینی بلژیک2020;75 (1): 9-1 doi: 10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. اثر ویروس هپاتیت و پیری بر متیلاسیون DNA در سرطان کبد انسان.هیستوپاتولوژی.2010؛ 25 (5): 647-654.doi: 10.14670/HH-25.647